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대한생식의학회지 제25권 제3호 2010년
초자화동결된 생쥐 미수정란의 cytoskeleton 및 염색체 변화
마리아 기초의학연구소, 마리아 산부인과
이봉경, 김은영, 남화경, 이금실, 윤산현, 박세필, 임진호,
The Cytoskeletal and Chromosomal Alteration in Vitrified Mouse Oocyte
Yi bk, Kim ey, Nam hk, Lee ks, Yoon sh, Park sp, Lim jh
본 연구는 동해방지제인 EFS35를 이용한 생쥐 미수정란의 초자화동결이 cytoskeleton과 염색체에 미치는 영향을 indirect immunocytochemistry와 염색체분석으로 확인하고자 실시하였다. 생쥐 미수정란은 M2 배양액에 35% ethylene glycol, 18% ficoll, 0.5 M sucrose와 10% FBS가 함유된 EFS35를 이용하여 초자화동결되었다. 본 연구에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 초자화동결된 미수정란의 융해후 생존율은 89.3%로써 노출군 (97.7%) 과 유의한 차이가 없었다 (p<0.05). 초자화동결이 미수정란의 microtubule과 microfilament에 미치는 영향을 조사하였던 바, 동결군 (95.5, 100%) 의 microtubule과 microfilament의 정상적인 형성율은 대조군 (97.5, 100%) 또는 노출군 (92.3, 100%) 의 결과와 비교하였을 떄 유의한 차이가 나타나지 않았다 (p<0.05). 또한, 체외수정후 동결군에서 정상적인 염색체수를 가진 난자의 비율도 73.5%로써, 대조군 (79.5%) 과 노출군 (78.7%) 의 결과와 유의한 차이가 없었던 바 (p<0.05), 생쥐 미수정란을 EFS35에 노출하고 동결하는 것이 미수정란의 cytoskeleton과 염색체 성상변화에 영향을 미치지 않는다는 것을 알 수 있었다. 따라서, 본 연구에서 사용된 동해방지제인 EFS35를 이용한 초자화동결법은 생쥐 미수정란의 동결에 적합하다는 것을 시사한다고 하겠다.
Recently, attention has been focused on cryopreservation for oocytes. For mouse oocytes in particular, cryopreservation by various slow freezing protocols has been investigated (Glenister et al., 1987), additionally, ultra-rapid freezing (Sathananthan et al., 1988; Surrey and Quinn, 1990) and vitrification (Kola et al., 1988; Nakagata, 1989) have been introduced in the mouse system. However, it was known that the cryopreservation of mouse oocytes has been shown to induce an alteration of spindle morphology, a decreased fertility, and a significant increase of anomalies in chromosome position (Glenister et al., 1987; Van der Elst et al., 1988; Bouquet et al., 1992). In earlier our study, Kim et al. (1998) demonstrated that the developmental capacity of mouse oocytes could be maintained when vitrified using the cryoprotectant EFS35. Based on this data, we tested whether the vitrification method using EFS35 has detrimental effect for cytoskeleton and chromosome constitution of mouse oocytes by immunocytochemistry and chromosome analysis (Giemsa staining).
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